宫腔粘连会导致子宫腔部分或统统阻滞国产 gv，对女性的活命产生要紧影响。据信，导致粘连的主要原因是手术后子宫内膜受伤导致的基质去世。当丢失的基质被畅通子宫壁的纤维组织取代时，就会造成粘连。当今，用于妇科手术的有用宫内防粘连障蔽很少。咱们计议了一种可降解的防粘连医疗器械原型，以驻扎粘连造成和复发，并归附子宫花式。咱们专注于理思的降解时刻，以杀青子宫统统上皮化，从而获取最好的防粘连成果和临床可用性。咱们开辟了一种三嵌段共聚物原型 [聚丙交酯与高分子量聚环氧乙烷集聚]。比较临床前研究评释注解了体内防粘连的功效。易于引入和在东谈主体子宫内最好部署证实了临床可用性。本文为开辟宫内医疗器械和开展临床本质提供了初步数据。

一、简介

宫腔粘连 (IUA) 会导致子宫腔部分或统统阻滞，对女性的活命产生要紧影响，因为它们会引起疼痛，月事失调会对生殖功能产生不利影响。宫腔粘连是由剖宫产、当然流产和宫内手术（息肉切除 3.6%、子宫隔切除 6.7%、肌瘤切除 21.6% 和流产清宫刮宫 37.6%）后发生的子宫内膜创伤引起的，这些手术会损坏子宫内膜基质。基质丢失被合计是导致宫腔粘连的主要原因，当丢失的基质被畅通子宫壁的纤维组织取代时，就会造成宫腔粘连。由此产生的子宫腔组织学和花式学改造会导致急性盆腔疼痛、慢性不适和机械性不孕。

张开剩余96%

休养 IUA 的黄金范例是宫腔镜粘连松解术，这是一种割断纤维桥以归附子宫花式、属目复发、促进子宫内膜再生和归附生殖功能的手术。可是，中度（23%）和重度（62%）粘连的术后复发率很高。最近提议了更有用地驻扎子宫腔内组织学病变造成和复发的替代策略，况兼驻扎或划定子宫壁畅通的防粘连障蔽被庸俗合计是最有用的。

由于枯竭更好的替代决策，妇科大夫使用故意为腹部粘连开辟的可经受障蔽来休养宫腔粘连。

妇科大夫讲演说，这些障蔽的计议使其难以通过阴谈路线插入，因为它们需要扩张子宫颈，况兼休养往往导致中度至重度 IUA 的抗粘连成果不及。抗粘连成果不及可能是由于在子宫统统上皮化之前被排斥。

子宫内膜创伤后子宫腔的统统上皮化关于有用休养 IUA 至关穷苦，因为它不错收敛子宫内膜壁的畅通。

咱们的研究见识是开辟一种专为宫内节育器计议的宫内医疗器械原型。具体筹商是获取实足的抗粘连成果，并开辟一种不错在外科手术后通过阴谈途直接接插入而不需要扩张子宫颈的安设。

咱们开辟了一种聚（丙交酯）共聚物薄膜原型，旨在快速铺展在通盘子宫壁上，并在足以发生再上皮化的时刻范围内降解。

在计议用于制造这种原型的生物材料时，降解、肿胀/张开和抗粘连特质被合计是穷苦的。咱们使用聚乳酸 (PLA) 来计议咱们的医疗诞生，因为它们庸俗用于生物医学欺诈，具有生物相容性，况兼其降解率易于退换。可是，PLA 是刚性的，不可在水性介质中推广，也不可划定细胞粘吟唱增殖。为了获取实足的推广特质和降解率以获取最好的抗粘连成果，咱们将高分子量亲水性团员物、聚环氧乙烷 (PEO) 和聚乳酸集聚在一谈，造成三嵌段共聚物 PLA-PEO-PLA。

抗粘连成果界说为莫得纤维组织且统统上皮化。凭证月事脱屑中统统上皮化所需的天数（5-6 天）和诞生在不过问受精的情况下不错在宫腔内停留的天数（15 天），忖度了医疗诞生在宫腔内保合手统统成型的时刻范围。咱们假定，在严重基质缺失的情况下，15 天就实足了，不会影响妊娠末端。

在本研究中，咱们的设战略略筹商了子宫统统上皮化的理思降解时刻，以杀青最好的防粘连成果，以及妇科手术的临床可用性。咱们将这项研究分为五个圭表：共聚物的合成和表征；共聚物推广、降解和防粘连成果的体外评估；在大鼠侧壁缺损-盲肠磨损模子中对共聚物防粘连成果和降解的体内评估以及最好共聚物的遴荐；最好共聚物在属目宫内粘连方面的体内功效；以及最好共聚物原型的体外宫里面署。

咱们开辟了一种基于聚丙交酯和高分子量聚环氧乙烷的可降解三嵌段共聚物原型。与当今的防粘连家具比拟，大鼠的临床前比较研究评释注解了其体内防粘连成果。易于引入和在东谈主体子宫内最好部署证实了其在临床环境中的可用性。这项研究为开辟一种不错属目宫内节育器并擢升生养率的防粘连宫内节育器提供了穷苦的初步数据。

二、末端

2.1 共聚物的合成与表征

为了开辟适用于妇科手术的可降解共聚物，咱们将生物相容性的热塑性材料共聚，将 PLA 片断与高分子量 PEO 集聚在一谈。这种计议的优点是不错退换乳酸与环氧乙烷（LA/EO）的比率。合成并评估了几种具有不同降解速率、推广性能和防粘连成果的共聚物。

合成了 PDLLA 和两种三嵌段共聚物 (TB32-100-32 和 TB77-100-77)，然后领受核磁共振 (1H-NMR)、毛细管粘度计、尺寸排阻色谱法 (SEC) 和差示扫描量热法 (DSC) 进行表征 (图 1)。PDLLA 的分子量由 SEC 细则。也对三嵌段共聚物进行了 SEC 分析，但得到的分子量值比 NMR 算计出的分子量低 10 倍。这种各异可能是由于使用聚苯乙烯范例的 SEC 校准导致的测量不准确。这些共聚物的两亲性质可能导致由于流体能源学体积的变化而导致的分子量不准确。为了擢升准确度，分子量是凭证 1.58 ppm 处峰 (PLA 嵌段中的 CH3 基团) 和 3.6 ppm 处峰 (PEO 嵌段中的 CH2 基团) 的 1H-NMR 积分比算计出来的。由于团员经过中丙交酯升沉不统统，最终的 LA/EO 摩尔比也低于运转比率（表 1）。然后使用扩散有序光谱法阐发团员经过中莫得造成 PLA 均聚物。

图 1. 共聚物膜的吸水率、体外降解和体外细胞粘附。a 37℃ 下盐溶液（运转 pH 7.4）中三嵌段膜和 PDLLA 的吸水率（%）（n = 3 个稀少样品）。b 浸入盐溶液（运转 pH 7.4；37℃）后体外降解经过中的特质粘度。c 45 分钟、1 小时 30 分钟和 3 小时后 NCTC 929 细胞在共聚物膜、PDLLA 膜、Seprafilm® 和对照组 (TCPS) 上的粘附情况。所稀有据点和范例偏差均为 n = 3 个稀少样品的末端。

表 1.PDLLA 团员物和 PDLLA-PEO-PDLLA 三嵌段共聚物的表征。

a 凭证 1.58 ppm 处的峰（PLA 嵌段中的 CH3 基团）和 3.6 ppm 处的峰（PEO 嵌段中的 CH2 基团）的 1H-NMR 积分比细则

b 通过毛细管粘度计细则

c 通过差示扫描量热法细则

d 通过尺寸排阻色谱法细则

通过毛细管粘度计对共聚物的表征标明，固有粘度随分子量的加多而加多。三嵌段共聚物的 DSC 测量标明，跟着分子量的加多，玻璃化逶迤温度 (Tg) 也随之加多。这些末端标明，与 PDLLA 比拟，具有高分子量 PEO 中心嵌段的三嵌段团员物会导致 Tg 裁减。

2.2 共聚物的体外评价

推广性能：对 TB32-100-32 和 TB77-100-77 的推广性能、体外降解和细胞粘附智力进行了评价。将吸水率与 PDLLA 进行比较，以考证使用 PEO 来加多亲水性 (图 1a)。PDLLA 薄膜吸水率较差，而 TB32-100-32 (500%) 和 TB77-100-77 (200%) 的三嵌段薄膜在 1 小时后吸水率有所加多，并在 10 天内合手续加多。三嵌段薄膜厚度也在 24 小时内从约 600 µm 加多到 1200 µm。

这些数据标明，跟着 LA/EO 比率的裁减，三嵌段薄膜的吸水率加多。TB32-100-32 的吸水量在第 14 天达到褂讪水平（1000%），TB77-100-77 的吸水量在第 22 天达到褂讪水平（600%）。PDLLA 嵌段的降解和 PDLLA 低聚物的融解不错解释 TB32-100-32 在褂讪水平后吸水量着落的原因。

降解：通过共聚物固有粘度的变化测量体外降解，固有粘度在 50 天内缓缓着落，标明分子量由于 PDLLA 嵌段的水解降解而着落（图 1b）。50 天后，共聚物繁芜，然后融解在降解溶液中。

跟着聚乳酸基团员物在体内的降解率加多，咱们瞻望共聚物的体内降解时刻将小于 50 天。

细胞粘附成果：通过将 NCTC-Clone 929 细胞千里积在共聚物膜、Seprafilm®、PDLLA 膜和组织培养聚苯乙烯 (TCPS)（细胞培养对照组）上来评估抗粘附性能（图 1c）。Seprafilm® 被选为第二个对照，因为它在细胞培养基中不溶性，况兼具有抗粘附性能。

45分钟、1小时30分和3小时后，与PDLLA和TCPS比拟，细胞在TB32-100-32上的粘附较少。咱们在 45 分钟和 3H 后获取了 TB77-100-77 的换取末端（95% 置信度）。在 1H30 时，由于值的范例偏差较大，细胞数目与 PDLLA 膜上的细胞数目莫得各异。

孵育 3 小时后，粘附在 TB32-100-32 和 TB77-100-77 上的细胞数与粘附在 Seprafilm® 上的细胞数相等。

粘附是由于纤维卵白融解机制的功能难熬导致纤维卵白造成和降解之间的不屈衡而引起的。在纤维卵白降解经过的功能难熬中，纤维卵白基质被成纤维细胞定植。因此，划定成纤维细胞的粘附是计议这种防粘连障蔽的穷苦筹商成分。本研究末端标明，在聚乳酸基团员物中添加 PEO 可显耀裁减细胞粘附，况兼与市售防粘连障蔽 (Seprafilm®) 相通有用。

2.3 共聚物的体内评价

体外实验标明，两种共聚物膜在降解速率、防粘连成果和推广性能方面均能骄慢临床要求。还需要评估体内降解速率和防粘连成果。使用家喻户晓的侧壁缺损和肠谈磨损的大鼠模子来评估共聚物的防粘连成果。该模子还允许在莫安妥然排斥风险的情况下聚集降解产物并评估降解率。

腹膜粘连属目中的防粘连成果：评估了 TB32-100-32、TB77-100-77 和 Hyalobarrier®（当今使用的防粘连障蔽）的属目腹膜粘连智力，并与手术对照组进行了比较。在第 5 天和第 12 天进行粘连评分（表 2）。末端清楚在表 3 中，宏不雅图像和组织学不雅察清楚在图 2 中。

表 2.腹膜粘连：评分系统。

表 3.术后第 5 天和第 12 天每个休养组的腹膜粘连发生率和术后粘连评分。

图 2.属目腹膜粘连。大鼠手术创伤后 5 天和 12 天伤口部位的宏不雅图像和组织学查验（HES 染色）。a 对照组：未进行休养。b 滴注 Hyalobarrier 凝胶休养组。c. 植入 TB77-100-77 薄膜休养组。宏不雅图像中，圆圈表示腹膜缺损部位，玄色箭头表示 TB77-100-77 残留物。组织学查验：Me：间皮细胞；CE：盲肠粘膜；SM：内脏平滑肌；AW：腹壁。比例尺：200 µm。

对照组腹膜粘连发生率高（83-100%），标明咱们的动物模子是评估共聚物抗粘连成果的有用时代。

Hyalobarrier 组术后第 5 天未出现粘连。第 12 天出现粘连，但与对照组比拟发生率无昭彰裁减（p = 0.5455）。TB32-100-32 组在第 5 天和第 12 天不雅察到粘连，与对照组比拟，发生率莫得昭彰裁减（辞别为 p = 0.1818 和 p = 0.5455）。TB77-100-77组在第5天和第12天莫得不雅察到粘连，标明术后粘连造成昭彰低于对照组（p<0.05）。

第5天时，与休养组比拟，对照组的总粘附评分为9.67（Hyalobarrier = 0，TB32-100-32 = 3，TB77-100-77 = 0）。粘连评分之间的各异具有统计学意思意思（p < 0.05）。第 12 天，对照组的总粘连评分为 7.33，而休养组（Hyalobarrier = 4.5、TB32-100-32 = 3.5 和 TB77-100-77 = 0）则为总粘连评分。对照组与 TB77-100-77 组之间的粘连评分之间的各异具有统计学意思意思（p < 0.05）。对照组与 Hyalobarrier 组和 TB32-100-32 组之间无统计学意思意思。

TB32-100-32 组不雅察到的粘连在 5 天和 12 天时在范围、严重进度和进度方面均有显耀的评分，这可能是由于共聚物的快速降解（5 天时莫得残留降解产物）。Hyalobarrier 组在 5 天后莫得出现粘连，但在第 12 天出现了严重且延迟的粘连，这很可能是由于快速排斥所致。比拟之下，TB77-100-77 组在第 5 天和第 12 天莫得出现任何粘连，这标明其抗粘连智力更有用，这很可能是由于降解进度适中。

对对照组、Hyalobarrier 组和 TB77-100-77 组进行了组织学查验（图 2）。对照组在第 5 天和第 12 天的样本清楚腹壁和盲肠之间发生粘连，有无数炎症细胞、成纤维细胞和胶原纤维（图 2a），标明粘连严重。

Hyalobarrier 组的组织在第 5 天显走漏愈合的腹膜部位，在由炎症细胞和无组织的胶原纤维构成的厚疤痕组织上有一层薄薄的间皮细胞（图 2b）。第12天时，盲肠肌肉层与腹壁统统交融，与对照比拟，粘连组织的密度和结构均较低。

比拟之下，用 TB77-100-77 休养的缺损腹壁在第 5 天和第 12 天统统再行上皮化，并在腹壁内层显走漏一层连气儿的间皮细胞，并有一层薄的疤痕组织。宏不雅图像清楚腹部名义愈合光滑，统统莫得粘连。腹腔内仍有 TB77-100-77 碎屑，标明降解速率实足。

共聚物的降解：通过在第2天、第5天和第12天聚集TB32-100-32和TB77-100-77残留物来测量三嵌段膜在腹腔中的体内降解。2 天后未发现 TB32-100-32 碎屑，标明统统降解（图 3a）。比拟之下，TB77-100-77 在第 2 天圆善无损，在第 12 天聚集了残留降解产物（图 3b），凸起标明 TB77-100-77 与 TB32-100-32 比拟具有最好降解速率。

图 3. 腹腔手术创伤后共聚物膜的体内降解研究。a TB32-100-32 薄膜在运转时刻以及 2、5 和 12 天后的残留物。b TB77-100-77 薄膜在运转时刻以及 2、5 和 12 天后的残留物。c TB77-100-77 薄膜在盐水浸泡后的体外降解和手术创伤后的体内降解经过中的特质粘度比较。d 三嵌段共聚物的降解暗示图。

咱们通过评估特质粘度值（图 3c）比较了 TB77-100-77 的体内和体外降解，以测量降解率的各异。与体外比拟，体内粘度值的裁减更为昭彰。TB77-100-77 在体内 2 天的特质粘度值与体外 12 天的值相似。

PLA-PEO-PLA 共聚物在体内和体外的水解降解归因于 PEO 嵌段的亲水性。水会侵蚀 PLA 块的酯键，导致 PLA 链变短，碎屑易溶于水（图 3d）。PEO 醚键无法通过水解降解而断裂，PLA 块降解后，PEO 块可溶于水。

体内快速降解可能是手术创伤引起的炎症响应所致。脂肪族聚酯的体内降解被酯解酶和巨噬细胞分泌的活性氧物资所放大。

TB77-100-77 体内降解合手续 5-6 天，并造成物理抗粘连障蔽，驻扎结缔组织畅通。子宫统统上皮化所需的忖度时刻为 5-6 天。因此，遴荐 TB77-100-77 在术后宫腔粘连模子中进行进一步测试。见识是覆按 TB77-100-77 驻扎结缔组织畅通和促进上皮再生的有用性。

2.4 最好共聚物的体内子宫防粘连成果

咱们评估了 TB77-100-77 在宫腔粘连大鼠模子中的防粘连成果，并与手术对照组和 Hyalobarrier® 组进行了比较。

在由研究东谈主员开辟的宫腔粘连模子中研究了防粘连成果，该模子需要去除子宫角的上皮层。

未经手术（图 4a），子宫组织学具有光滑且平日的折叠结构。平日子宫组织（图 4a）清楚腔内名义上有上皮细胞，子宫内膜基质层中有连气儿的上皮层和子宫内膜腺体。

图 4. 属目宫腔粘连。通过 H&E 染色对联宫组织进行组织学不雅察和放大。a 平日子宫组织（未手术）。b 对照组刮宫术后 7 玉阙腔粘连。c Hyalobarrier® 休养组刮宫术后 7 玉阙腔粘连。d TB77-100-77 休养组刮宫术后 7 皇帝宫组织。显微相片中的比例尺表示 200 µm。UL：子宫腔；Ep：上皮；En：子宫内膜；My：子宫肌层；Me：间皮。红色箭头表示粘连。

在手术对照组中，刮宫术后 7 天，统统角均因子宫粘连而祛除，证实了该模子的有用性和可重迭性。角组织切片清楚基质层相互粘连，中心无上皮细胞，子宫腔祛除（图 4b）。用红天狼星染色的胶原卵白清楚大部分子宫内膜中有新合成的纤维，标明愈合经过在 7 天后仍在持续。

在 Hyalobarrier 组中（图 4c），组织学染色清楚子宫内膜层存在庸俗的炎症情状，并伴有严重的间质粘连，标明大部分子宫内膜仍处于愈合经过中。不雅察到小的管腔结构，上皮细胞很少，莫得连气儿和均匀的管腔结构。在经过 Hyalobarrier 解决的八个角中，有六个角的基质层相互粘附。Hyalobarrier 组和手术对照组之间的粘连造成发生率无统计学各异（p = 0.46）。

在 TB77-100-77 组中，可见管腔结构和复层鳞状上皮层（图 4d）。胶原染色位于子宫内膜上皮层近邻的里面，标明与其他组比拟，愈合经过更完整。与其他组比拟，TB77-100-77 组的纤维化仅限于子宫内膜的一小部分。TB77-100-77 组中唯有八分之一的角发生间质粘连 - 与手术对照组比拟，发生率昭彰裁减（p < 0.05）。

这些末端浓烈标明 TB77-100-77 不错属目可重迭的 IUA 大鼠模子中的粘连。粘连的显耀减少不错通过 PEO 的防粘连作用与 PLA 块的降解速率（> 5 天）的集聚来解释。在上皮再造成经过中使用抗粘连物理障蔽不错驻扎子宫内膜壁的畅通和子宫粘连的造成。将来的研究将评估 TB77-100-77 对大鼠模子中当然生养力的影响，这些大鼠模子将经受反复宫内手术并诱发实验性粘连。

2.5 最好共聚物原型的体外宫里面署

进行了以下研究以评估 TB77-100-77 动作防粘连障蔽的临床可用性。贸易防粘连障蔽在宫腔镜查验后通过阴谈神色引入。宫腔镜的直径范围为 2.7 至 10 毫米。关于 TB77-100-77，咱们使用了直径为 5 毫米的插入器，该插入器被合计是临床使用的理思遴荐，因为它允许引入更大的防粘连膜名义。

对具有不同梯形花式和尺寸的TB77-100-77薄膜进行了测试，以遴荐在子宫中最好部署的原型。将梯形原型膜折叠成手风琴状，大底面为 2 厘米，短底面为 1 厘米，高 2.5 厘米，厚 600 微米，并引入直径为 5 毫米的 IUD 涂抹器（图 5a）。将薄膜推入好处的含有生理血清的体外子宫模子中。60 分钟后不雅察到薄膜的最好部署。由于血清的作用，薄膜推广，加多了其名义积，统统遮盖了腔壁（图 5b）。

图 5. TB77-100-77 原型体外宫内张开研究。a TB77-100-77 薄膜折叠后放入 5 mm IUD 给药管中；b 60 分钟后 TB77-100-77 薄膜在剖解子宫模子中的体外张开情况；c 37℃ 生理盐水点入宫腔暗示图。d 15 分钟后宫腔镜不雅察原型张开情况；e 60 分钟后翻开子宫并不雅察原型张开情况。白色虚线表示宫腔规模，黄色虚线表示宫颈管规模。

在一位经产妇的子宫中进行了离体子宫里面署。子宫切除术后，通过子宫颈滴注生理盐水溶液（图5c），并将5毫米宫内节育器施放器中的原型推入子宫腔并使其扩张。

15 分钟后，使用宫腔镜不雅察推广的薄膜和子宫体积（图 5d）。

60 分钟后，横向切开子宫，以不雅察 TB77-100-77 的部署情况（图 5e）。薄膜部署成果最好，因为它遮盖了从宫底到宫颈的子宫壁，况兼其天真性使其梗概符合子宫花式。将来，必须凭证统统子宫体积和患者妊娠（未产和经产）的前位来细则薄膜尺寸。

为了开辟适用于宫内手术的插入器，折叠薄膜的管的直径必须与宫颈的剖解结构一致。插入器的计议还应包括易用性（在东谈主体工程学和手术时刻方面）。

三、计划

IUA 会导致女性反复出现健康问题，这可能会使她们苍老并妨碍她们生养智力。咱们的防粘连宫内节育器的计议筹商了手术条目下的可用性以及统统上皮化所需的时刻。该安设是使用聚丙交酯和高分子量聚环氧乙烷 (PEO) 的共聚物开辟的。合成并表征了两批具有不同 LA/EO 比率的 PLA-PEO-PLA，并在体外评估了防粘连、降解和推广特质，以评估使用高分子量 PEO 的有用性。使用大鼠侧壁缺损-盲肠磨损模子来清楚抗粘连功效，并强调寻找降解时刻 > 5天的共聚物的必要性。在大鼠角质子宫内膜刮除术后宫内粘连模子中测试了产生最有但愿末端的共聚物 (TB77-100-77) 的宫内防粘连功效，末端清楚与商用防粘连凝胶 (Hyalobarrier®) 比拟，粘连发生率有所裁减。

咱们的原型可通过阴谈路线纵容插入离体东谈主子宫，在子宫内快速张开，并显走漏通过遍布通盘子宫壁来符合子宫花式的智力。这些末端突显了在水性介质中使器用有天真机械和推广特质的共聚物的风趣。

TB77-100-77 共聚物的功效偏激联系于 Hyalobarrier® 的比较上风，以偏激临床可用性，使其成为开辟可属目术后 IUA 造成的新式医疗诞生的有前途的生物材料。

咱们使用了一种可重迭且计划的宫内粘连模子，不错绝对评估共聚物的防粘连成果。

固然咱们梗概在实验中使用的小动物模子中获取可行的末端，但咱们需要进行更大领域的研究来评估咱们原型的临床计划性。

这项研究为开辟可属目 IUA 并擢升生养率的防粘连宫内节育器提供了穷苦的初步数据。当今正在制定该诞生的临床本质决策。临床本质的主要见识是评估导致不孕的医源性手术后的临床防粘连成果。

四、圭表

4.1 材料

PEO (POLYOX， Mw = 100，000 g mol^(−1)) 购自 Colorcon (Bazainville， France)。锡(II)2-乙基己酸酯 (Sn(Oct)2， 95%)、二氯甲烷、乙醚、四氢呋喃、氯仿 (CCL3) 购自 Sigma-Aldrich (St-Quentin Fallavier， France)。d，l-丙交酯 (d，l-LA) 购自 Corbion (Gorinchem， The Dutch)。最低必需培养基 (MEM)、马血清、l-谷氨酰胺、磷酸盐缓冲液、青霉素、链霉素、两性霉素 B 和非必需氨基酸购自 Gibco (Saint Aubin， France)。二十四孔非粘连培养板购自 Becton Dickinson 公司（法国 Le Pont de Claix）。

4.2 共聚物的合成与表征

以 100，000 g/mol 的 PEO 为引发剂，通过 d，l-丙交酯的开环团员合成了两种 PLA-PEO-PLA 三嵌段共聚物（辞别定名为 TB32-100-32 和 TB77-100-77）。往往，将 10 g PEO 和不同量的 d，l-丙交酯（20 和 10 g）引入两个烧瓶中，乳酸与环氧乙烷 LA/EO 的运转摩尔比辞别为 1.2（TB77-100-77）和 0.6（TB32-100-32）。将 PEO 和 d，l-丙交酯真空干燥 24 小时。将锡 (II)-2 乙基己酸酯 (PEO 羟基官能团数目的 0.1%) 加入干燥的团员烧瓶中。脱气后，将烧瓶在真空下密封，并在 130 ℃ 下团员 5 天。聚 (d，l-丙交酯) (定名为 PDLLA) 是按照研究东谈主员在 2005 年和 2008 年所态状的圭表合成的。简而言之，将崭新重结晶的 d，l-丙交酯与锡 (II)-2 乙基己酸酯夹杂在 100 mL 圆底烧瓶中。通过真空/氩气轮回脱气后，将烧瓶在动态真空下密封。让进料在 130 ℃ 下团员 5 天。将所得材料融解在丙酮中，并将溶液通过 5G 烧结玻璃过滤器过滤。通过添加甲醇千里淀 PDLLA 团员物，然后用极少甲醇清洗数次。将回收的化合物在 40 ℃ 下真空干燥 10 天。

使用 AMX300 Brucker 光谱仪 (300 MHz) 在室温下使用核磁共振光谱 (1H-NMR 光谱) 评估组合物，使用 CDCl3 动作溶剂，使用三甲基硅烷动作内标。

使用毛细管粘度计 (Schott Ubbelohde；Schott Instruments GmbH，德国好意思因茨) 在 25 ℃ 下使用 CHCl3 溶剂测量特质粘度 (dl/g)。

使用差示扫描量热法 (Perkin-Elmer DSC6000) 研究玻璃化逶迤 (Tg) 和熔化温度 (Tm)。

使用 Viscotek GPC Max 自动进样器和 Viscotek RI 检测器通过 SEC 测定 PDLLA 和 PEO 的数中分子量。分子量以聚苯乙烯范例表示，PDLLA 和 PEO 范例以四氢呋喃动作流动相，PEO 范例以水动作流动相。

4.3 共聚物的体外评价

推广性能：进行吸水本质以评估推广性能（图 1a）。使用溶剂浇铸法制备三嵌段和 PDLLA 薄膜。将统统1.6克共聚物粉末融解在15毫升二氯甲烷中。将溶液倒入铝板中，在真空下挥发溶剂 48 h。

为了细则水含量与孵育时刻的关联，将团员物薄膜在 37 ℃ 的磷酸盐缓冲盐水（pH 7.4）中搅动孵育

使用滤纸去革职义水。对薄膜进行称重，并按如下神色算计吸水率：

其中 mt 是在 t 时刻测量的分量，m0 是在 t = 0 h 测量的干样品分量。

共聚物的降解：将三嵌段和 PDLLA 薄膜在 37 ℃ 的磷酸盐缓冲盐水 (pH 7.4) 中孵育。将样品冻干并算计分量去世。

在 25℃ 下，使用 CHCl3 动作溶剂，用毛细管粘度计 (Schott Ubbelohde；Schott Instruments GmbH，德国好意思因茨) 测量固有粘度 (图 1b)。毛细管数为 532 03/0c，直径为 0.46 mm，团员物浓度为 5 mg/mL。

细胞粘附成果：对三嵌段共聚物膜（TB32-100-32 和 TB77-100-77）、PDLLA 膜、Seprafilm®（当今使用的防粘连障蔽）和对照 TCPS）进行了细胞防粘连性能的比较评估。图 1c 提供了此比较评估的数据。凭证 EN ISO 10993-5，建议使用 NCTC-Clone 929 评估医疗器械的体外细胞相容性。在本研究中，将 NCTC-Clone 929 细胞（小鼠成纤维细胞系 (ECACC 85011425)）培养在 500 ml MEM 中，其中含有 5 ml glutamax（1% 褂讪化谷氨酰胺）、50 ml 马血清、100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 链霉素。

PrestoBlue® 测定法用于评估细胞粘附。薄膜样品通过伽马射线灭菌（Synergy Health Company，法国马赛）。薄膜用 29.8 至 33.8 KGy 之间的辐射剂量解决，然后在 -20 ℃ 下储存，然后以三份重迭的神色放入 24 孔板中。统统将 150，000 个细胞直接接种到团员物薄膜 Seprafilm® 上以及直接接种到 TCPS 孔中。每孔在培养箱中保合手45分钟、1小时、30分钟和3小时。每孔中统统加入500μL 10% PrestoBlue®溶液，孵育1小时。统统200μL 从每个孔中取出溶液并放入96孔板中。

使用分光光度计多板读数器（VictorX3 多记号板读数器，Perkin-Elmer），使用 530 nm 的引发和 615 nm 的放射测量荧光读数。

4.4 共聚物的体内评估

咱们领先评估了统统子宫上皮化的理思降解时刻，以杀青最好的防粘连成果，并遴荐了最好共聚物。

实验经法国陶冶和研究部伦理委员会批准（公约号 02367.01，任务订单 1065），并凭证《实验室动物照管和使用指南》进行。咱们尽一切辛勤尽量减少动物的晦气，并使用产生可靠科学数据所需的最少动物数目。它们被安置在单独的笼子里，房间温度为 22 ℃，湿度为 55%（± 10%），不错目田获取食品（SAFE®）和自来水。每天对它们进行查验、称重和更换垫料，降服雅致实行和动物福利指南。

腹膜粘连属目中的抗粘连作用：使用溶剂浇铸法制备彩色共聚物膜。统统将 1.6 g 共聚物粉末融解在 1 mg 水不溶性紫色染料（染料参考：D&C Violet 2 K7014，东莞市富临塑胶原料有限公司供应）中的 15 mL 二氯甲烷中。将溶液倒入铝盘中，挥发溶剂48小时。共聚物膜通过伽马射线灭菌（Synergy Health Company，法国马赛），用 29.8 kGy 至 33.8 KGy 之间的辐射剂量解决，然后储存在 –20 ℃ 下直得手术今日。

统统 48 只 Wistar 雌性大鼠（250/275 克，8-10 周龄，由 Charles River Laboratories 提供）通过肌肉打针氯胺酮（50 毫克/千克）和赛拉嗪（5 毫克/千克）进行麻醉。用 Betadine® 对腹部进行消毒，并在切口前进行局部皮下麻醉（利多卡因 0.1%）。在腹部进行 4 厘米长的中线垂直切口并翻开腹腔。用敷料擦洗盲肠，直到切除点状出血和腹壁肌肉（1 厘米²）。

就地研究包括四组 12 只雌性大鼠：植入无菌薄膜（TB32-100-32）；植入无菌薄膜 (TB77-100-77)，滴注 Hyalobarrier®，不进行任何休养（对照组）。每组 12 只，在第 5 天和第 12 天进行评估，每天评估 6 只大鼠。

将共聚物薄膜切成 4 cm 长、3.5 cm 宽的矩形。将切好的薄膜直接放在盲肠和腹膜之间的侧腹。在闭合前将 1 微升生理盐水点入腹腔。在 Hyalobarrier® 组中，在盲肠和腹壁之间滴注 2 mL Hyalobarrier® 凝胶。关于对照组 (手术对照)，在盲肠擦伤和腹膜切除后直接缝合腹部。在手术后 48 小时内系统性地赐与丁丙诺啡 (0.02 mg/kg)。

在第 5 天和第 12 天辞别杀死 6 只大鼠。凭证粘连的进度、严重进度以及开释粘连器官所需的牵引力（粘连进度）评估粘连评分（表 2）。通过氯胺酮麻醉和打针戊巴比妥致死来杀死动物。

将盲肠、腹壁和周围组织产生的粘连样本在室温下浸泡在 10% 福尔马林中 24 小时，在磷酸盐缓冲盐水中清洗两次，然后浸泡在 70% 酒精中。将样品镶嵌石蜡中。将石蜡块切成 3 µm 厚的切片。然后用苏木精-伊红和天狼星红瞄准备好的切片进行染色。一位不知谈样原开始的剖解病理学家查验了组织以对粘连进行评分（图 2）。

共聚物的降解：本研究使用在第 5 天和第 12 天被安乐死的大鼠的残留共聚物（在上述就地防粘连研究中）来评估共聚物在 5-12 天的降解情况。为了评估共聚物在 2 天的降解情况，对另外三只经受换取手术的大鼠进行了防粘连研究。这三只大鼠在手术 2 天后被安乐死，以细则是否造成粘连。

将共聚物的残留物冻干、称重，并通过毛细管粘度计测量比浓对数粘度。

4.5 最好共聚物的体内子宫防粘连成果

一本大道香蕉大无l在线吗

12 只 Wistar 雌性（250/275 g 和 8-10 周）在肌肉打针氯胺酮（50 mg/kg）和赛拉嗪（5 mg/kg）后进行麻醉。用 Betadine® 对腹部进行消毒，并在切开前进行局部皮下麻醉（利多卡因 0.1%）。在腹部作念一个 4 厘米长的垂直正中切口，翻开腹腔。将每只雌性的两个角沿其长度（约2厘米）切开，并用刀片打磨内壁。统统有 24 个角，分为三组，每组 8 个角，咱们确保每只大鼠的 2 个角放在不同的组中（第 1 组未经受休养，第 2 组灌输 Hyalobarrier®，第 3 组植入无菌共聚物丝（TB77-100-77 S））。将 Hyalobarrier® 凝胶和共聚物丝放入切开的角中，并用可经受缝线（5/0 Vicryl）缝合角。

另外一只未经受手术的大鼠被用作对照参考，以清楚平日的子宫组织学（图 4a 无手术）。

使用 Noztek 粉末长丝挤出机（英格兰肖勒姆）热挤出身产直径为 1.5 毫米的长丝。细丝通过伽马射线（Synergy Health society）灭菌，辐射剂量在 27.5 至 30.6 kGy 之间，并储存在 −20℃ 下直得手术今日。

聚集 3 组和用作对照的未手术雌性大鼠的子宫角并镶嵌石蜡中。将石蜡块切成 3 µm 厚的切片。然后用苏木精-伊红和天狼星红瞄准备好的切片进行染色。剖解病理学家对样本的开始不知情，对聚集的角进行了查验和粘连评分。

接下来，咱们评估了妇科手术的临床可用性。

4.6 最好共聚物原型的体外宫里面署

原型由使用与之前态状的换取决策获取的 TB77-100-77 薄膜制成，并切割成梯形，大底边为 2 厘米，短底边为 1 厘米，高 2.5 厘米，厚度为 600 µm。将薄膜折叠起来，以便不错将其放入直径为 5 毫米的 IUD 插入管中。原型部署研究领先在好处的体外剖解子宫模子中进行。剖解模子由两片聚乙烯薄膜计议而成，使用加热的刮刀将它们焊合在一谈。模子的尺寸（子宫顶部 4 厘米；子宫底部 1.5 厘米；子宫长度 5 厘米）遴荐为与多产患者的子宫尺寸绝顶匹配。

本研究中使用的子宫取自又名在法国尼姆大学病院妇产科经受子宫切除术的患者。本研究经尼姆大学病院东谈主类研究伦理审查委员会批准（IRB 编号 105604），并获取又名因子宫腺肌病经受腹腔镜子宫切除术的经产妇（33 岁）的知情首肯。子宫被甩掉在 37℃ 的恒温箱中。宫腔镜通过宫颈插入，以获取宫腔的明晰视图，并纪录子宫乖张、肌瘤或荒谬肿瘤或组织的情况。用宫腔镜通过宫颈滴注生理盐水溶液。

将TB77-100-77薄膜推入含有生理盐水溶液的子宫腔后，15分钟后使用宫腔镜不雅察共聚物薄膜的溶胀和张开性能。60分钟后，横向切开子宫，不雅察原型在宫腔内的张开情况。

4.7 统计和可重迭性

体外细胞粘附评估：数据以平均值±范例差表示。统计数据来自三个稀少样本。使用Kruskal-Wallis覆按和Holm圭表进行统计分析，以比较团员物和对照（Seprafilm®，PDLLA和TCPS）。

腹膜粘连属目中的抗粘连作用：统统定量值均以平均值±SD 表示。使用 R 统计软件进行统计分析。咱们忖度了粘连评分从对照组的 10/10 裁减到 TB77-100-77 组的 5/10 的动物数目。每组动物数目为 6 只，以杀青 5% 的 alpha 风险和 80% 的功率。使用 Kruskall-Wallis 覆按比较粘连评分。成对组比较领受 Mann-Whitney U 覆按。昭彰性覆按为双侧，alpha 风险为 0.05。

东莞市富临塑胶原料有限公司：供欺诈于医疗诞生的着色剂

神采/称号：D&C Violet No.2 （D&C 紫罗兰2号）

批准使用：隐形眼镜，手术缝合线，东谈主工晶状体，半月板钉

神采/称号：D&C Green No.6 （D&C 绿色6号）

批准使用：隐形眼镜，手术缝合线，东谈主工晶状体

神采/称号：[Phthalocyaninato(2-)] copper [酞菁(2-)]铜

批准使用：隐形眼镜，手术缝合线，东谈主工晶状体

采购更多FDA批准的医疗器械染料 和 筹商染料对应FDA批准的具体医疗诞生，请立即计划富临塑胶！

邮箱：li@fulinsujiao.com

公司地址：广东省东莞市樟木头镇塑金外洋1号楼810

发布于：广东省